Το μέσο κυτταρικής καλλιέργειας είναι η θρεπτική βάση για την τεχνητή μίμηση του in vivo περιβάλλοντος ανάπτυξης των ζωικών κυττάρων και τη διατήρηση της επιβίωσης και του πολλαπλασιασμού των κυττάρων in vitro. ένα θρεπτικό συστατικό. Ποια είναι λοιπόν τα κοινά προβλήματα που συναντώνται στη χρήση του μέσου κυτταροκαλλιέργειας; Ας κάνουμε μια ανάλυση.
1. Επιλογή συστήματος ρυθμιστικού διαλύματος και αλλαγή του pH του μέσου κυτταροκαλλιέργειας
Δεδομένου ότι το βέλτιστο pH για τα περισσότερα κύτταρα είναι μεταξύ 7.0 και 7.4, οι αποκλίσεις από αυτό το εύρος μπορεί να έχουν επιβλαβείς επιπτώσεις στην ανάπτυξη των κυττάρων. Ωστόσο, οι απαιτήσεις σε pH διαφόρων κυττάρων δεν είναι ακριβώς οι ίδιες. Τα πρωτεύοντα καλλιεργημένα κύτταρα έχουν γενικά κακή ανοχή στις διακυμάνσεις του pH, ενώ άπειρες κυτταρικές σειρές έχουν ισχυρή ανοχή. Επομένως, στην πρωτογενή καλλιέργεια, το ρυθμιστικό σύστημα στο μέσο καλλιέργειας είναι πιο σημαντικό. Το γενικό μέσο κυτταρικής καλλιέργειας χρησιμοποιεί ένα ισορροπημένο σύστημα άλατος, αλλά διαφορετικά μέσα καλλιέργειας ή η ίδια σειρά μέσων καλλιέργειας χρησιμοποιούν διαφορετικά συστήματα ισορροπημένων αλάτων. Για παράδειγμα, η σειρά 199 και η σειρά MEM έχουν όλες το μέσο καλλιέργειας συστήματος του Hanks και το σύστημα καλλιέργειας του Earle. βάση. Ορισμένα μέσα δεν είναι το προαναφερθέν συμβατικό σύστημα ισορροπημένου αλατιού, όπως το μέσο RPMI1640, το μέσο F12. Το σύστημα ισορροπημένου άλατος του μέσου χαμηλού ορού ΜΕΜ δεν είναι επίσης ένα συμβατικό σύστημα ισορροπημένου άλατος και η ρυθμιστική ικανότητα του συστήματος ισορροπημένων αλάτων είναι ισχυρότερη από αυτή του συμβατικού συστήματος ισορροπημένου αλατιού.
κυτταρικής καλλιέργειας
Υπάρχουν πολλοί λόγοι για την πτώση του pH κατά την κυτταροκαλλιέργεια. Όταν τα κύτταρα αναπτύσσονται πολύ γρήγορα, η τιμή του pH συνήθως πέφτει γρήγορα, κάτι που μπορεί να λυθεί με την έγκαιρη διέλευση, την αύξηση της αναλογίας διέλευσης ή τη μείωση του όγκου του ορού. Επιπλέον, το υπερβολικό σφίξιμο του καπακιού της φιάλης καλλιέργειας, η ανεπαρκής ρυθμιστική ικανότητα του ρυθμιστικού συστήματος NaHC03, η εσφαλμένη συγκέντρωση άλατος στο μέσο καλλιέργειας, η μόλυνση από βακτήρια, ζύμες ή μύκητες μπορεί επίσης να προκαλέσουν συχνά γρήγορη πτώση του pH. Αυτή τη στιγμή, μπορείτε να το λύσετε με τους εξής τρόπους:
1) Αυξήστε τη συγκέντρωση NaHC03 στο μέσο καλλιέργειας ή μειώστε τη συγκέντρωση CO2 στον επωαστήρα. Όταν η περιεκτικότητα σε NaHC03 είναι μεταξύ 2,0 g/L και 3,7 g/L, η αντίστοιχη συγκέντρωση CO2 είναι 5~10 τοις εκατό.
2) Αλλαγή σε μέσο καλλιέργειας2-ανεξάρτητο από CO.
3) Χαλαρώστε σωστά το καπάκι της φιάλης. Προσθέστε ρυθμιστικό διάλυμα HEPES στο μέσο καλλιέργειας για να κάνετε την τελική συγκέντρωση 10-25 mM.
4) Χρησιμοποιήστε το διάλυμα καλλιέργειας με βάση το άλας Earle στο περιβάλλον καλλιέργειας CO2 και χρησιμοποιήστε το διάλυμα καλλιέργειας που παρασκευάστηκε από το αλάτι του Hanks στο περιβάλλον ατμοσφαιρικής καλλιέργειας.
5) Απορρίψτε την καλλιέργεια ή αποστειρώστε με αντιβιοτικά εάν η αιτία είναι μόλυνση.
2. Διάφορα σημαντικά πρόσθετα χρησιμοποιούνται συνήθως σε μέσα κυτταροκαλλιέργειας και προβλήματα στα οποία πρέπει να δοθεί προσοχή στη διαδικασία χρήσης
Το κόκκινο της φαινόλης χρησιμοποιείται ως δείκτης του pH σε μέσα κυτταροκαλλιέργειας. Γενικά, η τιμή pH του μέσου μπορεί να κριθεί από την επίδραση δείκτη του ερυθρού της φαινόλης, αλλά η περιεκτικότητα σε ερυθρό φαινόλης σε μέσο κυτταροκαλλιέργειας χαμηλού ορού ή χωρίς ορό είναι διαφορετική από εκείνη στο συνηθισμένο μέσο κυτταροκαλλιέργειας και δεν μπορεί να παρατηρηθεί με γυμνά μάτια ή Η τιμή του pH προσδιορίζεται εμπειρικά και συνιστάται η χρήση μετρητή pH για μέτρηση. Το κόκκινο της φαινόλης συνήθως δεν έχει σημαντική επίδραση στην ποιότητα των βιολογικών προϊόντων που παράγονται σε μέσα κυτταροκαλλιέργειας που περιέχουν ορό και μπορεί επίσης να αφαιρεθεί με τεχνικές καθαρισμού, αλλά το κόκκινο φαινόλης μπορεί να προκαλέσει ενδοκυτταρική ανισορροπία νατρίου/καλίου σε μέσα κυτταροκαλλιέργειας χωρίς ορό , επηρεάζοντας την κυτταρική ανάπτυξη.
πλάκα κυτταροκαλλιέργειας
Το διττανθρακικό νάτριο χρησιμοποιείται κυρίως ως ρυθμιστικό σύστημα στο μέσο κυτταροκαλλιέργειας και έχει επίσης ως αποτέλεσμα τη ρύθμιση της οσμωτικής πίεσης. Συνήθως η συνιστώμενη ποσότητα διττανθρακικού νατρίου στις οδηγίες χρήσης του προϊόντος είναι μια τυπική και ασφαλής ποσότητα, η οποία λαμβάνεται με βάση την πρακτική εμπειρία σε επιστημονική βάση. Ωστόσο, λόγω διαφορετικών κυτταρικών γραμμών (στελέχη), το ίδιο κύτταρο μπορεί να προσαρμοστεί σε διαφορετικά περιβάλλοντα (διαφορετική κυτταρική ανοχή κ.λπ.), και υπάρχουν περιφερειακές διαφορές στην ποιότητα του νερού κ.λπ., οι οποίες μπορούν επίσης να τροποποιηθούν ελαφρώς στην πραγματική παραγωγή διαδικασία, αλλά η χρήση των Όσοι χρειάζεται να κάνουν τις αντίστοιχες εξετάσεις (φυσικοχημικές και κυτταρικές δοκιμές παραγωγής κ.λπ.).
Το HEPES είναι ένα μη ιοντικό ρυθμιστικό διάλυμα με καλή ρυθμιστική ικανότητα στην περιοχή pH από 7,2 έως 7,4 και μπορεί να είναι τοξικό για ορισμένα κύτταρα σε υψηλές συγκεντρώσεις. Το ρυθμιστικό διάλυμα HEPES μπορεί να χρησιμοποιηθεί με χαμηλά επίπεδα ανθρακικού νατρίου (0.34 g/L) για να αντισταθμίσει την αύξηση της οσμωτικής πίεσης που προκαλείται από την προσθήκη επιπλέον HEPES. Το εύρος ασφαλούς συγκέντρωσής του είναι 10 ~ 25 mmol/L.
Το πυροσταφυλικό νάτριο μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως εναλλακτική πηγή άνθρακα σε κυτταροκαλλιέργεια, και παρόλο που τα κύτταρα προτιμούν τη γλυκόζη ως πηγή άνθρακα, τα κύτταρα μπορούν επίσης να μεταβολίσουν το πυροσταφυλικό νάτριο απουσία γλυκόζης.
Η γλουταμίνη είναι πολύ ασταθής σε διάλυμα. Μπορεί να αποσυντεθεί στο 50 τοις εκατό στους 4 βαθμούς για 1 εβδομάδα. Είναι καλύτερο να το παρασκευάζετε χωριστά κατά τη χρήση, να το αποθηκεύετε σε ψυγείο -20 βαθμών και να το προσθέτετε στο μέσο κυτταροκαλλιέργειας πριν από τη χρήση.
