Εφαρμογή φιάλης ορού
Η φιάλη ορού είναι κατασκευασμένη από βοριοπυριτικό γυαλί χαμηλής εκχύλισης και η άχρωμη διαφανής φιάλη πληροί τις απαιτήσεις των USP Type I και ASTM E 438 Type I Standard Class A. Μπορεί να αποστειρωθεί σε αυτόκλειστο στους 121 βαθμούς για 20 λεπτά και μπορεί να χωριστεί σε 125 ml , 250ml, 500ml, 1L, 2L ανάλογα με τον όγκο.
Το μπουκάλι ορού είναι ένα δοχείο για την αποθήκευση ορού, ο οποίος είναι γενικά κατασκευασμένος από υλικό PET με διαδικασία εμφύσησης με διάταση με έγχυση. Το μέσο είναι το θρεπτικό συστατικό που απαιτείται για την ανάπτυξη των κυττάρων. Σύμφωνα με την πηγή του, διακρίνεται σε συνθετικό και φυσικό μέσο, τα οποία μπορούν να αποθηκευτούν σε μπουκάλια ορού.
Μπουκάλι ορού
Φυσικό μέσο:
Το πιο συχνά χρησιμοποιούμενο φυσικό μέσο είναι ο ορός, βασικά ο ορός μόσχου. Ο ορός περιέχει μια ποικιλία παραγόντων ανάπτυξης κυττάρων, παράγοντες που προάγουν την πρόσφυση και τις πολυδραστικές ουσίες τους. Σε συνδυασμό με συνθετικό μέσο, τα κύτταρα μπορούν να πολλαπλασιαστούν και να αναπτυχθούν ομαλά. Ο ορός πρέπει να φυλάσσεται σε ειδικές φιάλες ορού στους -5 βαθμούς έως -20 βαθμούς .
Συνθετικό μέσο:
Το συνθετικό μέσο διαμορφώνεται αυστηρά σύμφωνα με τον τύπο και την ποσότητα των ουσιών που απαιτούνται από τα κύτταρα. Υπάρχουν πολλοί τύποι και γνωστά συστατικά, τα οποία διευκολύνουν τον έλεγχο των πειραματικών συνθηκών. Περιέχει υδατάνθρακες, αμινοξέα, λιπίδια, ανόργανα άλατα, βιταμίνες, ιχνοστοιχεία και κυτταρικούς αυξητικούς παράγοντες. Ωστόσο, σε σύγκριση με το φυσικό μέσο, ορισμένα φυσικά άγνωστα συστατικά δεν μπορούν να αντικατασταθούν από γνωστά χημικά συστατικά. Επομένως, το βασικό συνθετικό μέσο που χρησιμοποιείται στην κυτταροκαλλιέργεια πρέπει επίσης να προσθέσει μια ορισμένη ποσότητα συστατικών φυσικού μέσου για να υπερνικήσει τη συνθετική καλλιέργεια. Ανεπαρκής βάση, η πιο συνηθισμένη πρακτική είναι η προσθήκη ορού μόσχου.
Το σχήμα του μπουκαλιού ορού είναι τετράγωνο, εύκολο στην κατανόηση, ανθεκτικό στην όξινη και αλκαλική διάβρωση, η θερμοκρασία ευθραυστότητας είναι -70 βαθμοί και εξακολουθεί να έχει μια ορισμένη σκληρότητα σε -30 βαθμό . Είναι ένα καλό δοχείο συσκευασίας, είτε πρόκειται για φυσικό μέσο είτε για συνθετική καλλιέργεια. μπορεί να αποθηκευτεί σε φιάλες ορού.
Για την απομόνωση, καλλιέργεια και ταυτοποίηση ενδοθηλιακών προγονικών κυττάρων ανθρώπινου ομφάλιου λώρου και τη δημιουργία ακυτταρικών αγγειακών ικριωμάτων με βελτιωμένη μέθοδο κατάψυξης-απόψυξης
Να διερευνήσει τη σκοπιμότητα και την αξία κλινικής εφαρμογής των ενδοθηλιακών προγονικών κυττάρων που απομονώθηκαν και καλλιεργήθηκαν από αίμα ανθρώπινου ομφάλιου λώρου.
Μέθοδοι: Συλλέχτηκε το αίμα από τον ομφάλιο λώρο των εμβρύων που υποβλήθηκαν σε πλήρη καισαρική τομή στο Τμήμα Μαιευτικής και Γυναικολογίας του Πρώτου Συνεργαζόμενου Νοσοκομείου του Ιατρικού Κολλεγίου Bengbu, τοποθετημένο σε φιάλη ορού που περιείχε 50U/ml ηπαρίνης υπό άσηπτες συνθήκες, αποθηκεύτηκαν σε παγοκιβώτιο 4 μοιρών και μεταφέρθηκαν στα κύτταρα Στο δωμάτιο καλλιέργειας, τα μονοπύρηνα κύτταρα του αίματος του ομφάλιου λώρου ελήφθησαν με φυγοκέντρηση βαθμίδωσης πυκνότητας. Τα ληφθέντα μονοπύρηνα κύτταρα χωρίστηκαν σε δύο μέρη και προστέθηκαν μέσο Μ199 ορού εμβρύου μόσχου (FCS-M199) και μέσο αυτόλογο ορού Μ199 (AS-M199). Και σπάρθηκαν σε τρυβλία καλλιέργειας με και χωρίς ανθρώπινη φιμπρονεκτίνη (HFN) (με την ένδειξη: F(0), F(1), A(0), A(1)) αντίστοιχα. Πραγματοποιήθηκαν in vitro επαγωγή, διαφοροποίηση και επέκταση.
Παρατηρήθηκαν οι μορφολογικές αλλαγές των προσκολλημένων κυττάρων κατά τη διάρκεια ολόκληρης της διαδικασίας επαγωγής και διαφοροποίησης και αναγνωρίστηκαν από διαφορετικές οπτικές γωνίες σε συνδυασμό με σχετικές τεχνικές όπως η ανοσοϊστοχημεία, ο ανοσοφθορισμός και η κυτταρομετρία ροής.
Αποτελέσματα: Μετά από 12 ημέρες καλλιέργειας, τα μονοπύρηνα κύτταρα αίματος ομφάλιου λώρου άρχισαν να προσκολλώνται. Μετά το 3d, άρχισε να εμφανίζεται το σχήμα της ατράκτου και στη συνέχεια ο αριθμός των προσκολλημένων κυττάρων σταδιακά αυξήθηκε και σταδιακά έγινε ατρακτοειδής. Όταν καλλιεργήθηκε για έως και μία εβδομάδα, σχηματίστηκε μια τυπική αποικία με κύτταρα ατράκτου γύρω και στρογγυλά κύτταρα στο κέντρο. Όταν τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν για 14 ημέρες, τα διασυνδεδεμένα κυτταρικά σμήνη συνδέθηκαν σταδιακά και σχημάτισαν μια δομή που μοιάζει με δίκτυο. Ταυτόχρονα, με τη συνεχή αύξηση του χρόνου καλλιέργειας, τα μακριά ατρακτοκύτταρα άρχισαν επίσης να βραχύνονται σταδιακά και παρουσίασαν μια τυπική αλλαγή που μοιάζει με λιθόστρωτο.
Τα προσκολλημένα κύτταρα καλλιεργήθηκαν για μία εβδομάδα και παρατηρήθηκε ότι ο αριθμός των κυττάρων στο μέσο με ανθρώπινη φιμπρονεκτίνη ήταν σημαντικά υψηλότερος από εκείνον χωρίς ανθρώπινη φιμπρονεκτίνη και δεν υπήρχε σημαντική αλλαγή στον αριθμό των κυττάρων στα δύο διαφορετικά μέσα. #Αναλώσιμα οργάνων#