διαδικασία καλλιέργειας κυττάρων θηλαστικού
Τα κύτταρα των θηλαστικών περνούν από τη διαδικασία εξαγωγής ιστού, πρωτογενούς καλλιέργειας και υποκαλλιέργειας. Η υποκαλλιέργεια μπορεί να χωριστεί σε καλλιέργεια κυτταρικής γραμμής και καλλιέργεια κυτταρικής γραμμής σύμφωνα με τις συνθήκες. Κάθε διαδικασία περιγράφεται εν συντομία ως εξής:
Πρωτογενής καλλιέργεια: Αφού αφαιρεθεί ο ιστός από το ζώο, τεμαχίζεται, υποβάλλεται σε επεξεργασία με διάφορα ένζυμα (συνήθως θρυψίνη), χηλικούς παράγοντες (συνήθως EDTA) και μηχανικές μεθόδους (επαναλαμβανόμενη αναρρόφηση και εμφύσηση πιπέτας) και στη συνέχεια διασπείρεται σε μεμονωμένα κύτταρα, Καλλιεργείται σε ένα κατάλληλο μέσο που επιτρέπει στα κύτταρα να επιβιώσουν, να αναπτυχθούν και να πολλαπλασιαστούν. Η πρωτογενής κυτταρική καλλιέργεια αναφέρεται γενικά σε κυτταρική καλλιέργεια εντός 10 διελεύσεων μετά την απομάκρυνση των κυττάρων από ένα ζώο.
Μετά την πρωτογενή κυτταρική καλλιέργεια, την κυτταρική διαίρεση και αναπαραγωγή, η καλλιέργεια αυξάνεται σταδιακά, η ανάπτυξη γεμίζει το χώρο καλλιέργειας και στη συνέχεια έρχονται σε επαφή μεταξύ τους, με αποτέλεσμα την αναστολή της επαφής και ο ρυθμός ανάπτυξης σταδιακά επιβραδύνεται ή και σταματά. Πρέπει να ξανασπείρεται σε νέες φιάλες καλλιέργειας για υποκαλλιέργεια.
Διέλευση (πέρασμα): Τα πρωτογενή κύτταρα αφαιρούνται από τη φιάλη καλλιέργειας, παρασκευάζεται το κυτταρικό εναιώρημα και χωρίζεται σε δύο ή περισσότερες φιάλες καλλιέργειας για περαιτέρω καλλιέργεια, η οποία ονομάζεται υποκαλλιέργεια.
Κυτταρική γραμμή: Μια κυτταρική γραμμή είναι μια κυτταρική γραμμή μετά το πρώτο πέρασμα στην πρωτογενή καλλιέργεια. Εάν ο χρόνος επιβίωσης μιας κυτταρικής γραμμής είναι περιορισμένος, ονομάζεται πεπερασμένη κυτταρική γραμμή. Μια κυτταρική σειρά που αποκτά απεριόριστη αναπαραγωγική ικανότητα και συνεχίζει να επιβιώνει ονομάζεται συνεχής κυτταρική γραμμή ή άπειρη κυτταρική γραμμή.
Κυτταρική σειρά: Από τις βιολογικά αναγνωρισμένες κυτταρικές σειρές, ο κυτταρικός πληθυσμός που σχηματίζεται με απομόνωση μεμονωμένων κυττάρων, καλλιέργεια ή διαλογή ονομάζεται κυτταρική γραμμή. Στη συνέχεια απομονώνονται κυτταρικοί πληθυσμοί διαφορετικών σχημάτων και καλλιεργούνται από την πρωτογενή κυτταρική σειρά για να σχηματίσουν υποκλώνους.
Συνθήκες κυτταροκαλλιέργειας θηλαστικών
Διαφορετικά κύτταρα θηλαστικών απαιτούν βασικές συνθήκες καλλιέργειας σε κάθε στάδιο
1. Αποστειρωμένο και μη τοξικό περιβάλλον: άσηπτη επεξεργασία του μέσου καλλιέργειας και όλου του εξοπλισμού καλλιέργειας. προσθήκη αντιβιοτικών στο μέσο καλλιέργειας για την αποφυγή μόλυνσης κατά τη διάρκεια της διαδικασίας καλλιέργειας. τακτική αντικατάσταση του μέσου καλλιέργειας για την απομάκρυνση των μεταβολιτών για την αποφυγή βλάβης στα καλλιεργημένα κύτταρα.
2. Διατροφή: Το υγρό συνθετικό υλικό περιέχει σάκχαρα, αμινοξέα, αυξητικούς παράγοντες, νερό, ανόργανα άλατα, ιχνοστοιχεία κ.λπ. Συνήθως είναι απαραίτητο να προστεθούν φυσικά συστατικά όπως πλάσμα και ορός
3. Κατάλληλη θερμοκρασία και τιμή pH: Η βέλτιστη θερμοκρασία για τα κύτταρα του ανθρώπου και των θηλαστικών είναι 36±0,5 βαθμοί. Η κατάλληλη τιμή pH είναι 7.2-7.4.
4. Περιβάλλον αερίου: Το περιβάλλον αερίου είναι γενικά μικτό αέριο "95 τοις εκατό αέρας συν 5 τοις εκατό διοξείδιο του άνθρακα". Το οξυγόνο είναι ένα αέριο απαραίτητο για τον κυτταρικό μεταβολισμό και το διοξείδιο του άνθρακα διατηρεί το pH του μέσου.
