Πρέπει να πλύνουμε το κιτ οκτώ σωλήνων PCR μετά τη χρήση. Υπάρχουν μερικοί τρόποι για να καθαρίσετε το Κιτ Οκτάλ PCR. Τι πρέπει να προσέχω όταν το χρησιμοποιώ;
Αρχή της πειραματικής μεθόδου: Η μεμβράνη silica gel συνδέεται με το DNA υπό συνθήκες υψηλής περιεκτικότητας σε αλάτι και διαχωρίζεται από το DNA υπό συνθήκες χαμηλού αλατιού. Αστάρια, μονοπυρήνωση, ένζυμα, ορυκτέλαια, ιόντα άλατος κ.λπ.
Πειραματικά υλικά: Προϊόντα PCR, αντιδραστήρια, κιτ, κιτ καθαρισμού PCR, όργανα, αναλώσιμα, πλάκες προετοιμασίας DNA 96 φρεγατού, πλάκες βαθιάς φρεσκάς 96 φρεγατού, πλάκες σχήματος V 96
1. Ο κατασκευαστής οκτώ σωλήνων PCR μιλά για τη σύνθεση, την αποθήκευση και τη σταθερότητα του κιτ
1. Οδηγίες, αναλώσιμα: 96-καλά πιάτο προετοιμασίας DNA, 96-καλά 1.6ml βαθιά-καλά πιάτο, 96-καλά V-διαμορφωμένο πιάτο.
2. Ρυθμιστικό PCR-Α: Λύση σύνδεσης DNA. Φυλάσσουμε καλά κλειστά σε θερμοκρασία δωματίου. Εάν συμβεί καθίζηση, θα πρέπει να διαλυθεί σε ένα ζεστό λουτρό στους 65°C και να ψυχθεί σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση.
3. Συμπύκνωμα buffer W2: αφαιρέστε το διάλυμα αλατιού. Πριν από τη χρήση, προσθέστε αιθανόλη στον όγκο που καθορίζεται στη φιάλη, αναμίξτε καλά και αποθηκεύστε σε θερμοκρασία δωματίου. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί 100% αιθανόλη ή 95% απόλυτη αιθανόλη.
4. Eluent: 2.5 mM Tris-HCl, pH 8.5, αποθηκευμένο σε σφραγισμένη κατάσταση σε θερμοκρασία δωματίου.
2. Ο κατασκευαστής των οκτώ-συζευγμένη σωλήνες PCR μιλά για τα βήματα λειτουργίας
Οι χρήστες μπορούν να επιλέξουν αρνητική πίεση ή φυγοανάπλευρη.
Α. Μέθοδος αρνητικής πίεσης
1. Συνδέστε σωστά τη συσκευή αρνητικής πίεσης, τοποθετήστε την πλάκα προετοιμασίας DNA 96 φρεαλιίων στη συσκευή αρνητικής πίεσης. προσθέστε 3 φορές ρυθμιστικό PCR-A στο PCR, την πέψη ενζύμων, την επισήμανση ενζύμων ή το διάλυμα αντίδρασης αλληλουχίας (εάν το ρυθμιστικό διάλυμα PCR-A είναι μικρότερο από 100 μl, προσθέστε 100 μl)· αναμίξτε καλά και μεταφέρετε σε μια πλάκα προετοιμασίας DNA 96 φρεγαίων, ενεργοποιήστε και ρυθμίστε την αρνητική πίεση σε -25-30 ίντσες Hg και αναρροφάτε αργά το διάλυμα στην πλάκα.
2. Προστίθενται 0,3 ml ρυθμιστικού διαλύματος W2 και απορροφά το διάλυμα. Πλένουμε δύο φορές με 0,3 ml ρυθμιστικού διαλύματος W2 με τον ίδιο τρόπο.
Επιβεβαιώστε την προσθήκη απόλυτης αιθανόλης στον υποδεικνυόμενο όγκο του συμπυκνώματος Buffer W2 στη φιάλη αντιδραστηρίου.
3. Διατηρήστε την αρνητική πίεση και εξαγάγετε την πλάκα προετοιμασίας DNA 96 φρεγαίων για 10 λεπτά.
4. Αλέστε την πλάκα προετοιμασίας DNA 96 φρεατζών 6 φορές στο μακρύ ινώδες ιστό με το σωλήνα αποστράγγισης στραμμένο προς τα κάτω.
5. Τοποθετήστε την πλάκα προετοιμασίας DNA 96 φρεγατων σε μια πλάκα σχήματος V 96 φρεγατων, προσθέστε 25-30ul νερού ή elute στο κέντρο της μεμβράνης και αφήστε να σταθεί για 1 λεπτό σε θερμοκρασία δωματίου. Το DNA εκλούστηκε με φυγοτεσπεντρισμό στα 3 000 x g για 5 λεπτά.
Β. Φυγοκεντρική
1. Προσθέστε 3 τόμους ρυθμιστικού PCR-A (εάν το buffer PCR-A είναι μικρότερο από 100 μl, προσθέστε 100 μl) σε αντιδράσεις PCR, πέψης, επισήμανσης ενζύμων ή αλληλουχίας. αναμίξτε και μεταφέρετε σε DNA 96 φρεαμάτων σε πλάκα προετοιμασίας 96 φρεαμάτων. Τοποθετήστε την πλάκα προετοιμασίας DNA σε μια πλάκα γεώτρησης βάθους 96 1,6 ml, φυγοκεντρηθείτε στα 1000 x g για 1 λεπτό και απορρίψτε το διηθήματος.
2. Σε μια πλάκα προετοιμασίας DNA 96 φρεγατών, προσθέστε 0,3 ml ρυθμιστικού διαλύματος W2, φυγοκεντράστε στα 1000×g για 1 λεπτό και απορρίψτε το διηθήματος. Πλένουμε ξανά με τον ίδιο τρόπο με 0,3 ml ρυθμιστικού διαλύματος W2. Επιβεβαιώστε την προσθήκη απόλυτης αιθανόλης στον υποδεικνυόμενο όγκο του συμπυκνώματος Buffer W2 στη φιάλη αντιδραστηρίου.
3. Τοποθετήστε την πλάκα προετοιμασίας DNA 96 φρεατζών σε ένα πιάτο βαθιάς φρεάτιας 96 φρεατζών 96-φρεγαίων 1.6ml και φυγοκέντρηση σε 3 000×g για 10 λεπτά.
4. Τοποθετήστε την πλάκα προετοιμασίας DNA 96 φρεγατων σε μια καθαρή κάτω πλάκα σχήματος V 96, προσθέστε 25-30ul νερού ή elute στο κέντρο της μεμβράνης και αφήστε να σταθεί για 1 λεπτό σε θερμοκρασία δωματίου. Το DNA εκλούστηκε με φυγοτεσπεντρισμό στα 3 000 x g για 5 λεπτά.
Οι κατασκευαστές οκταπύρηνων σωλήνων PCR μιλούν για θέματα που χρειάζονται προσοχή:
1. Η θέρμανση του eluent ή του νερού σε 65°C μπορεί να βοηθήσει να βελτιώσει την αποδοτικότητα έκλουσης.
2. Τα μόρια DNA είναι όξινα, συνιστάται η αποθήκευση σε 2,5 mM Tris-HCl, pH 8,5 εκλούσεις.
