Για τα κοινά πιάτα Petri με γυάλινο πυθμένα στην αγορά, δημιουργείται συνήθως μια τρύπα στο κάτω μέρος ενός πλαστικού τρυβλίου Petri και στη συνέχεια κολλάται ένα γυαλί κάλυψης ή μια πλάκα κυψέλης με πάχος 170-220 μm στο κάτω μέρος του πιάτο Petri με κόλλα χωρίς σκιά ή σιλικαζέλ. Δεν είναι ολόκληρος ο πάτος του πιάτου Petri από γυαλί. Η κατάλληλη περιοχή για παρατήρηση βρίσκεται μόνο στην περιοχή της διάτρησης. Ωστόσο, λόγω της υδροφοβικότητας του γυαλιού, κατά την καλλιέργεια κυττάρων, τα κύτταρα δεν μπορούν να προσκολληθούν καλά στο γυαλί και η κατάσταση ανάπτυξης δεν είναι καλή, ενώ ακόμη και το φαινόμενο της αποκόλλησης των κυττάρων εμφανίζεται κατά τη συνεστιακή απεικόνιση σάρωσης.
Προκειμένου τα κύτταρα να προσκολληθούν καλά, είναι απαραίτητο να επιβεβαιωθεί ότι έχουν επικαλυφθεί συγκεκριμένα αντιδραστήρια πρωτεΐνης πριν χρησιμοποιηθούν τρυβλία από γυάλινο πυθμένα για κυτταρική καλλιέργεια.
πάπλωμα μόνος σου
Διαφορετικές κυτταρικές καλλιέργειες απαιτούν διαφορετικά αντιδραστήρια επικάλυψης. Ταυτόχρονα, επειδή η πρωτεΐνη που χρησιμοποιείται για την επικάλυψη είναι βιολογικό προϊόν, η καθαρότητα του προϊόντος και η δοσολογία της πρωτεΐνης επικάλυψης διαφορετικών εταιρειών είναι διαφορετικές. Αυτή η τεχνική ανάρτηση είναι μόνο για αναφορά. Η συγκεκριμένη δοσολογία των αντιδραστηρίων επικάλυψης πρέπει να αναφέρεται στις οδηγίες των εμπορικών σημάτων που χρησιμοποιούνται. . Και είναι καλύτερο να κάνετε ένα πείραμα βαθμίδωσης με τα αντιδραστήρια που χρησιμοποιείτε για να βρείτε την καταλληλότερη συγκέντρωση επίστρωσης.
Ακολουθεί ένα παράδειγμα Poly-L-Lysine (PLL, sigma, P4832, 100ug/ml):
Η επικάλυψη PLL είναι κατάλληλη για τη συντριπτική πλειοψηφία των κυττάρων, ειδικά για την καλλιέργεια νευρώνων στο κεντρικό σύστημα. Είναι απαραίτητο να γίνει η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη (ug/cm2) ανά μονάδα επιφάνειας για να φτάσει στην επιθυμητή ποσότητα κατά τη χρήση. Η συνιστώμενη ποσότητα επικάλυψης για PLL σε αυτό το παράδειγμα είναι 2 ug/cm2. Είναι απαραίτητο να υπολογιστεί η ποσότητα της πρωτεΐνης που απαιτείται σύμφωνα με την περιοχή επικάλυψης και τον όγκο επικάλυψης.
Για παράδειγμα: τρυβλίο Petri με γυάλινο πυθμένα 35 mm, η περιοχή ανάπτυξης κυττάρων είναι 3,5 cm2, η περιοχή επικάλυψης είναι 4,1 cm2 και ο όγκος του διαλύματος επικάλυψης είναι 400 ul και, στη συνέχεια, η συνιστώμενη δόση είναι 2 ug/cm2. Τότε χρειάζονται 8,2 ug PLL σε ένα μόνο φρεάτιο. Εάν προστεθούν μόνο 400 ul διαλύματος PLL, η συγκέντρωση του διαλύματος PLL είναι 20,5 ug/ml (περίπου 20 ug/ml). Επομένως, το μητρικό διάλυμα πρέπει να αραιωθεί με υπερκαθαρό νερό.
Ειδικά βήματα:
1. Αραιώστε το μητρικό διάλυμα PLL 1:5 με υπερκαθαρό νερό.
2. Προσθέστε 400 ul αραίωσης PLL σε κάθε τρυβλίο Petri με γυάλινο πυθμένα 35 mm.
3. Επωάστε για 1-2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου και αναρροφήστε την αραίωση PLL.
4. Πλύνετε προσεκτικά 3 φορές με 2 ml διαλύματος PBS ή μέσου χωρίς ορό και αναρροφήστε το διάλυμα πλύσης.
5. Προσθέστε απευθείας το εναιώρημα κυττάρων για καλλιέργεια.
Αξιολόγηση μεθόδου
Λόγω των διαφορετικών ιδιοτήτων των διαφόρων πρωτεϊνών επικάλυψης, διαφορετικές πρωτεΐνες επικάλυψης χρησιμοποιούνται με διαφορετικούς τρόπους. Συχνά δημιουργείται νέα μόλυνση λόγω της ανάγκης επικάλυψης πιάτων από γυάλινο πάτο. Επιπλέον, συχνά ανακαλύπτεται μόλυνση μετά την ανύψωση των κυψελών, γεγονός που όχι μόνο καθυστερεί το χρόνο, αλλά και σπαταλά αναλώσιμα κιτ. Άλλωστε, τα επικαλυμμένα αντιδραστήρια πρωτεΐνης και τα πιάτα με γυάλινο πάτο με διασφάλιση ποιότητας είναι ακριβά (τα πιάτα με γυάλινο πάτο κακής ποιότητας ενδέχεται να διαρρεύσουν επειδή η κόλλα δεν είναι κολλώδης ή η χρησιμοποιούμενη κόλλα είναι τοξική για τα κύτταρα).
Συνεστιακά πιάτα Petri χωρίς επίστρωση
Για τα παιδιά που θέλουν να εξοικονομήσουν χρόνο και προσπάθεια, είναι πιο βολικό να χρησιμοποιούν ομοεστιακά πιάτα καλλιέργειας χωρίς επίστρωση.
Παράγοντες που πρέπει να λάβετε υπόψη όταν επιλέγετε ένα κατάλληλο τρυβλίο καλλιέργειας είναι: εάν είναι κατάλληλο για να προσκολληθούν τα δικά σας κύτταρα, εάν τα οπτικά χαρακτηριστικά του δίσκου καλλιέργειας πληρούν τις συνεστιακές απαιτήσεις.
Τα πιάτα Petri που πληρούν τις απαιτήσεις των παραπάνω παραγόντων δεν περιορίζονται σε πιάτα με επικάλυψη γυάλινου πάτου. Στην πραγματικότητα, όλοι γνωρίζουν ότι τα πλαστικά πιάτα είναι φθηνότερα και ευκολότερα προσκολλώνται στα κύτταρα από το γυαλί. Ακολουθεί ένα παράδειγμα συνεστιακού πιάτου καλλιέργειας από τη Shanghai Jingan, για να μιλήσουμε για τις παραμέτρους που πρέπει να έχει ένα πιάτο καλλιέργειας που είναι κατάλληλο για ομοεστιακά πειράματα:
Μπορεί να φανεί ότι οι φυσικές παράμετροι των πιάτων ομοεστιακής καλλιέργειας που πληρούν τις απαιτήσεις άμεσης χρήσης είναι πολύ κοντά στο γυαλί, αλλά ταυτόχρονα έχουν επίσης υδρόφιλες ιδιότητες, οι οποίες μπορούν να κάνουν τα περισσότερα κύτταρα να προσκολλώνται καλύτερα. και η ολκιμότητα είναι καλύτερη από το γυαλί. Επιτρέπει στις περισσότερες κυτταρικές σειρές και πρωτεύοντα κύτταρα να προσκολλώνται απευθείας στον τοίχο και δεν είναι εύθραυστο, κάτι που είναι μια καλή επιλογή.
Μπορείτε επίσης να βρείτε το πιο κατάλληλο πιάτο ομοεστιακής καλλιέργειας για το πείραμά σας σύμφωνα με τις συγκεκριμένες πειραματικές σας απαιτήσεις και τις παραμέτρους στον παραπάνω πίνακα.
Αξιολόγηση μεθόδου
Η επιλογή αυτού του τύπου τρυβλίου Petri δεν απαιτεί πρόσθετη επίστρωση, μειώνοντας σημαντικά τον κίνδυνο μόλυνσης. Και επειδή ο πλαστικός πάτος είναι ευκολότερος να δουλέψει, δεν χρειάζεται κόλλα για να το στερεώσετε στον πάτο του πιάτου Petri. Εξαλείψτε την πιθανότητα διαρροής ή κυτταροτοξικότητας.
