Οι πλάκες κυτταροκαλλιέργειας χρησιμοποιούνται συνήθως και σημαντικά αναλώσιμα σε πειράματα κυτταροκαλλιέργειας επειδή μπορούν να εξοικονομήσουν χρόνο και υλικά αντιδραστηρίων για πειράματα κυττάρων και μπορούν να δημιουργήσουν πολλές δυναμικές μεταβλητές ταυτόχρονα για να διευκολύνουν την παρατήρηση και την ανίχνευση.
πλάκα καλλιέργειας
1. Τα καπάκια των πλακών καλλιέργειας 96, 24-πηγαδιού ή των τρυβλίων Petri είναι πολύ χαλαρά, πράγμα που είναι βολικό για αερισμό, αλλά θα γλιστρήσουν και βακτήρια, μούχλα και άλλοι ρύποι;
Απάντηση: (1) Το εξώφυλλο είναι πολύ χαλαρό και ανήκει στην ημι-ανοιχτή κουλτούρα. Ο σκοπός αυτού είναι να αναπνέει (στην πραγματικότητα, να επιτρέψει στο CO2 εκτός του δίσκου καλλιέργειας να ανταλλάσσεται πλήρως με το δίσκο καλλιέργειας για να διατηρηθεί η τιμή pH του μέσου).
(2) Υπάρχουν πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα, γεγονός που αυξάνει την πιθανότητα ρύπανσης. Επιπλέον, αυτό προκαλεί την εξάτμιση του υγρού στο τρυβλίο Petri, το οποίο είναι αξιοσημείωτο για την ακριβή δοσολογία των φαρμάκων. Απαραίτητα λοιπόν τα ακόλουθα δύο μέτρα:
α) Ο αέρας στη θερμοκοιτίδα πρέπει να είναι καθαρός (κανονική υπεριώδης ακτινοβολία, καθαρισμός με οινόπνευμα και η θερμοκοιτίδα πρέπει να ενεργοποιείται και να απενεργοποιείται όσο το δυνατόν λιγότερο)
β) Η υγρασία στη θερμοκοιτίδα πρέπει να διατηρείται στο 100 τοις εκατό ανά πάσα στιγμή (νεροχύτης στον οποίο τοποθετείται αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό στη θερμοκοιτίδα). Προσοχή στην άσηπτη λειτουργία!
2. Τα κύτταρα μου ενοφθαλμίζονται στην πλάκα καλλιέργειας και τα κύτταρα μαζεύονται πάντα στο περιφερικό τμήμα. Τι πρέπει να κάνω? Βλέπω ότι τα κελιά κάποιων συμπολεμιστών είναι μαζεμένα στη μέση. Είναι πρόβλημα με την ποιότητα της πλάκας;
Α: Πώς ανακατεύετε τα κύτταρα σας; Φυσάει ή κουνάει με πιπέτα την πλάκα καλλιέργειας; Αν είναι το τελευταίο, και κουνηθεί κυκλικά, είναι πολύ πιθανό τα κελιά λόγω της φυγόκεντρης δύναμης να εκτοξευθούν στο γύρω μέρος, με αποτέλεσμα να βρεθεί η μέση των κελιών. Λιγότερο, πάνω από τέσσερις εβδομάδες! Μπορείτε να το δοκιμάσετε μόνοι σας!
Ένας καλός τρόπος: προτού καλλιεργήσετε την πλάκα με σπόρους, βάλτε την πλάκα καλλιέργειας στον επωαστήρα για μερικές ώρες κορεσμού και μετά βγάλτε την. Κατά τη σπορά των κυττάρων, η δύναμη πρέπει να είναι ελαφριά. Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε έναν σταλάκτη στο πλάι της οπής της πλάκας καλλιέργειας αργά Προσθέστε για να επιτρέψετε στο κυτταρικό εναιώρημα να ρέει στα φρεάτια της πλάκας και τα καλλιεργημένα κύτταρα να αναπτυχθούν ουσιαστικά ομοιόμορφα. Θυμηθείτε να μην κουνάτε ποτέ τον ταλαντωτή διαφορετικά τα κύτταρα σας θα συσσωρευτούν όπως είπατε.
3. Τα κύτταρά μου περνούν κανονικά, αλλά όταν ένας τύπος μπαίνει σε μια πλάκα έξι φρεατίων (ανεξάρτητα από την προσθήκη φαρμάκου και τον έλεγχο), υπάρχουν πάντα δύο ή τρία πηγαδάκια (τυχαία) κύτταρα που δεν αναπτύσσονται καλά, είναι μικρά και φαίνονται να σπάσει. Το έχει συναντήσει κανείς αυτό; Ποιός είναι ο λόγος?
Α: Μπορεί να σχετίζεται με τη θερμοκρασία του υγρού που προσθέτετε. Εάν τα κελιά σας έχουν μόλις αφαιρεθεί για να αλλάξετε το μέσο και να προσθέσετε το μέσο, και το υλικό αφαιρεθεί επίσης από το ψυγείο 4 μοιρών σύντομα, είναι εύκολο για τα κύτταρα να παγώσουν μέχρι θανάτου. Συνιστάται να επωάζετε καλύτερα το υλικό στον επωαστήρα για 15 λεπτά πρώτα.
Επιπλέον, σχετίζεται επίσης με την κατάσταση ανάπτυξης των κυττάρων σας. Τα κύτταρα πριν από τη δόση μπορούν να επωαστούν με υψηλές συγκεντρώσεις ορού. Βεβαιωθείτε ότι τα κύτταρα είναι σε καλή κατάσταση.
Ή μπορεί να επωαστεί σε ένα λουτρό νερού 37-βαθμού ή το πρόβλημα της ίδιας της πλάκας καλλιέργειας, μπορείτε να δοκιμάσετε μια άλλη πλάκα καλλιέργειας. Μια άλλη πιθανότητα είναι το πρόβλημα της κυτταρικής κατάστασης, ρυθμίστε τη συγκέντρωση στον ορό κατά τη σπορά της πλάκας.
4. Τις τελευταίες μέρες, χρησιμοποίησα μια πλάκα καλλιέργειας έξι φρεατίων για τον εμβολιασμό κυττάρων. Μετά από καλλιέργεια για 24 ώρες, άλλαξα το μέσο. Πριν αλλάξω το μέσο, παρατήρησα ότι τα κελιά προσκολλήθηκαν στον τοίχο και η κατάσταση ήταν πολύ καλή. Αφού άλλαξα το μέσο, χρησιμοποίησα αμέσως το μικροσκόπιο. Παρατηρήθηκε ότι σχεδόν τα μισά από τα κύτταρα σε κάθε φρεάτιο έδειξαν μια κατάσταση σχεδόν θανάτου. Τα κύτταρα γίνονται πολύ μικρά και παράγουν πολλά υπολείμματα, ενώ τα άλλα μισά κύτταρα είναι φυσιολογικά, υπάρχει μια λεκάνη απορροής μεταξύ μη φυσιολογικών κυττάρων και φυσιολογικών κυττάρων, το πάνω μισό κύκλο είναι καλό, το κάτω μισό κύκλο δεν είναι καλό, πώς είναι Αυτό? Τι συμβαίνει?
Α: Μπορείτε να δείτε εάν υπάρχει κάποιος από τους παρακάτω λόγους
ένα. Η πλάκα καλλιέργειας δεν τοποθετείται οριζόντια.
σι. Τι θα λέγατε για το μέσο καλλιέργειας σας, εάν το μέσο καλλιέργειας λήξει, τα κύτταρα δεν θα προσκολληθούν. Δοκιμάστε ένα φρεσκοπαρασκευασμένο μέσο
ντο. Μπορεί να είναι το πρόβλημα της πλάκας. Δεν είναι πρόβλημα να αλλάξετε το πιάτο άλλης μάρκας ή να χρησιμοποιήσετε το μπουκάλι καλλιέργειας.
ρε. Προσέξατε την επίδραση του ανεμιστήρα κατά την αλλαγή του μέσου, ειδικά όταν υπάρχουν πολλές πλάκες καλλιέργειας που πρέπει να αντικατασταθούν, είναι εύκολο να προκαλέσετε συρρίκνωση και ρήξη των κυττάρων λόγω ανέμου και απώλειας νερού. Αν ναι, το μέσο πρέπει να αλλάζει ένα προς ένα, και μην φοβάστε να σπαταλήσετε την πιπέτα, προσέξτε την αποτελεσματικότητα της λειτουργίας!
5. Έχουν περάσει τέσσερις ημέρες από τότε που τα κύτταρα χωνεύτηκαν και εμβολιάστηκαν σε 24-πλάκα φρεατίου και το μεσαίο τμήμα κάθε φρεατίου ήταν πάντα γεμάτο. Το μέσο πλύθηκε με PBS κάθε μέρα και η ίδια κατάσταση συνέβη όταν το μέσο άλλαξε την επόμενη μέρα. Οι άκρες είναι μακριές και το κέντρο είναι γεμάτο νεκρά κύτταρα;
Απάντηση: Εάν τα κελιά είναι πυκνά γύρω και αραιά στη μέση, υπάρχουν περίπου οι εξής λόγοι:
Το μέσο προστέθηκε πολύ λίγο. Κυρίως λόγω του προβλήματος της τάσης του υγρού.
Εάν υπάρχει λιγότερο νερό στο κάτω μέρος της θερμοκοιτίδας.
Το τίναγμα μετά τη σπορά των κυττάρων ήταν πάρα πολύ. Τα κύτταρα κατανέμονται γύρω λόγω φυγόκεντρης δύναμης.
Το κλειδί για το εάν τα κελιά είναι ομοιόμορφα κατανεμημένα είναι ότι κάθε τύπος κελιών έχει μεμονωμένες διαφορές και ότι οι λειτουργίες κελιών άλλων ατόμων μπορεί να μην είναι κατάλληλες για εσάς. Επομένως, πρέπει να εξερευνήσετε μόνοι σας και να βρείτε ένα σύνολο κανόνων που είναι μοναδικοί για τα δικά σας κύτταρα. Έχετε την εξής εμπειρία:
(1) Όλα τα κυτταρικά εναιωρήματα που πρόκειται να σπαρθούν πρέπει να αναμειγνύονται με μια πιπέτα πριν από τη σπορά.
(2) Σύμφωνα με τις καταγραφές, ο όγκος υγρού της 24-πλάκας φρεατίου είναι 1 ml, στην πραγματικότητα, ο όγκος του 1 ml είναι αρκετός.
(3) Κατά τον ενοφθαλμισμό, προσθέστε το δείγμα αργά και θυμηθείτε να περιστρέψετε ελαφρά το άκρο της πιπέτας. Το δείγμα δεν μπορεί να προστεθεί πολύ γρήγορα για να αποφευχθεί η συσσώρευση κυττάρων σε ένα σημείο προσθήκης δείγματος και προσέξτε να προσθέσετε δείγματα σε διαφορετικά μέρη, δηλαδή προσθέτοντας το κινητό πιστόλι. Κεφάλι, κάνουν τεχνητά τα κύτταρα να τείνουν να είναι ομοιόμορφα κατανεμημένα. Κάτι τέτοιο έχει ως αποτέλεσμα την ομοιόμορφη κατανομή των κυττάρων.
