Όπως όλοι γνωρίζουμε, οι τύποι κυττάρων που καλλιεργούνται στο εργαστήριο μπορούν να χωριστούν χονδρικά σε δύο τύπους: προσκολλημένα κύτταρα και κύτταρα εναιωρήματος, και μόνο λίγοι τύποι κυττάρων υπάρχουν και στις δύο καταστάσεις.
Τα κύτταρα αιωρήματος αναφέρονται σε έναν τύπο κυττάρων που μπορούν να αναπτυχθούν σε αιωρούμενη κατάσταση σε ένα μέσο χωρίς να βασίζονται σε στηρίγματα, όπως τα λεμφοκύτταρα και τα περισσότερα κύτταρα που προέρχονται από το σύστημα αίματος. (όπως κύτταρα λευχαιμίας ποντικού WEHI-3, κύτταρα λευχαιμίας ανθρώπου K-562, HL-60). Στη βιομηχανία, όλο και περισσότερα προσκολλημένα κύτταρα έχουν εξημερωθεί και καλλιεργηθεί σε πλήρες εναιώρημα. Επί του παρόντος, τα κύτταρα SP2/0, NS0, CHO, BHK και HEK293 χρησιμοποιούνται κυρίως στη βιομηχανία και χρησιμοποιούνται κυρίως για την παραγωγή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών. Τα κύτταρα διέλευσης που χρησιμοποιούνται συνήθως σε κτηνιατρικά βιολογικά προϊόντα περιλαμβάνουν κυρίως κύτταρα BHK21 καλλιεργημένα σε πλήρες εναιώρημα, κύτταρα MDCK. και κύτταρα Vero, κύτταρα ΡΚ, κύτταρα ST, κύτταρα Marc145 κ.λπ. με τη βοήθεια καλλιέργειας εναιωρήματος μικροφορέων, κάθε κύτταρο έχει διαφορετικά χαρακτηριστικά.
Κυψέλες ανάρτησης
Κυψέλες αναστολής "thp-1" 200x
Γενικά, τα κύτταρα αιωρήματος είναι ευκολότερα στον χειρισμό από τα προσκολλημένα κύτταρα επειδή δεν απαιτείται θρυψινοποίηση για τη διέλευση των κυττάρων αιωρήματος. Αλλά αυτό δεν σημαίνει ότι τα κύτταρα αιωρήματος αναπτύσσονται ευκολότερα από τα προσκολλημένα κύτταρα. Για τους αρχάριους, είναι πιο δύσκολο. Υπάρχουν πάντα διάφορα προβλήματα: για παράδειγμα, γιατί εμφανίζονται πάντα τα νεκρά κύτταρα και η διαφοροποίηση των κυττάρων; συμφωνείται ότι το πέρασμα είναι εύκολο, αλλά το αποτέλεσμα θα είναι η διαφοροποίηση. τα προβλήματα εμφανίζονται ξανά μετά από κρυοσυντήρηση και ανάκτηση!
Στη συνέχεια, ας συζητήσουμε μερικά βασικά σημεία σχετικά με την καλλιέργεια κυττάρων αιωρήματος~
Σημείο 1: Αρκετή υπομονή, είναι πολύ απαραίτητη
Πολλά κύτταρα αιωρήματος έχουν σχετικά χαμηλή βιωσιμότητα όταν μόλις ανακτώνται από την κρυοσυντήρηση. Αυτή τη στιγμή, πρέπει να είμαστε αρκετά υπομονετικοί ώστε να περιμένουμε τα κύτταρα να ολοκληρώσουν την αυτο-επισκευή τους και να εισέλθουν στη φάση της λογαριθμικής ανάπτυξης. Για παράδειγμα, η THP-1 (ανθρώπινη μονοκυτταρική λευχαιμία) χρειάζεται συχνά 7-10 ημέρες περιόδου ανάρρωσης από την απόψυξη έως τον κανονικό πολλαπλασιασμό. Το Jurkat, ο κλώνος Ε6-1 (ανθρώπινα κύτταρα Τ λεμφοκυτταρικής λευχαιμίας) χρειάζονται επίσης 5-7 ημέρες μετά την ανάρρωση. Επιστρέψτε στην κατάσταση πριν από την κατάψυξη. Οι αρχάριοι μπορεί να εγκαταλείψουν την προπόνηση κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, οπότε παρακαλούμε να είστε πιο υπομονετικοί! Η καλλιέργεια τέτοιων κυττάρων είναι επίσης μια διαδικασία καλλιέργειας υπομονής!
Σημείο 2: Πιάστε την πυκνότητα εμβολιασμού
Σε γενικές γραμμές, η πυκνότητα των κυψελών ανάρτησης δεν πρέπει να είναι μικρότερη από 500,000/ML. Πολλά κύτταρα αιωρήματος εξαρτώνται από την πυκνότητα και ο μη πολλαπλασιασμός που προκαλείται από χαμηλή πυκνότητα είναι επίσης ένα από τα κοινά προβλήματα για τους αρχάριους. Φυσικά, υπάρχουν πολύ λίγα κύτταρα των οποίων η κατάσταση χειροτερεύει όταν η πυκνότητα είναι υψηλή, όπως το W6/32 (κύτταρα υβριδώματος Β κυττάρων ποντικού). Επομένως, είναι πολύ σημαντικό να αναζητήσετε σχετικές πληροφορίες για να κατανοήσετε τα χαρακτηριστικά των κυττάρων πριν καλλιεργήσετε άγνωστα κύτταρα. Μόνο γνωρίζοντας τον εαυτό σου και τον εχθρό μπορείς να κερδίσεις όλες τις μάχες!
Η συχνότητα της αντικατάστασης του μέσου δεν πρέπει να περιορίζεται στο «σαφώς». Τα κύτταρα είναι ζωντανά πράγματα. Κατά τη διάρκεια ενός συνεχούς κύκλου καλλιέργειας, συγκεκριμένα θρεπτικά συστατικά όπως συμπληρωματικό μέσο και γλυκόζη μπορούν να προστεθούν αρκετές φορές ανάλογα με την κατάσταση ανάπτυξης των κυττάρων για να διατηρηθεί μια καλή κατάσταση ανάπτυξης των κυττάρων. . Κατά τη διαδικασία της καλλιέργειας εναιωρήματος, με τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την κατανάλωση θρεπτικών ουσιών στο αρχικό μέσο και την αύξηση των μεταβολιτών, η βιωσιμότητα των κυττάρων θα μειωθεί και η έγκαιρη συμπλήρωση θρεπτικών συστατικών θα κάνει τα κύτταρα σε ένα σχετικά καλό περιβάλλον διαβίωσης. Δεν θα υπεισέλθω σε λεπτομέρειες εδώ και αποφύγετε τη συχνή φυγοκέντρηση και την αντικατάσταση υγρού.
Ας μιλήσουμε για τη μέθοδο αντικατάστασης υγρού:
①Φυγοκεντρική μέθοδος πλήρους ανταλλαγής υγρών
Δηλαδή, αφαιρέστε όλο το παλιό μέσο με φυγοκέντρηση (800-1000rpm, 5 λεπτά) και αντικαταστήστε το με φρέσκο μέσο. Αυτή η μέθοδος είναι κατάλληλη για αντικατάσταση μέσου "στερεού δέρματος" καλά ανυψωμένων κυψελών αιώρησης (όπως το K562) ή για την τρέχουσα κατάσταση όπου τα κύτταρα είναι σε καλή κατάσταση και η πυκνότητα είναι υψηλή, με αποτέλεσμα μεγάλη κατανάλωση μέσου. Το πλεονέκτημα αυτής της μεθόδου είναι ότι το μέσο αλλάζει σχολαστικά και ορισμένα κυτταρικά υπολείμματα μπορούν να αφαιρεθούν, αλλά θα προκαλέσει επίσης έναν ορισμένο βαθμό μηχανικής βλάβης στα κύτταρα.
②Φυγοκεντρική μέθοδος ημιανταλλαγής
Δηλαδή, με φυγοκέντρηση (800-1000rpm, 5 λεπτά) 50 τοις εκατό αιωρήματος κυττάρων, αντικαταστήστε το 50 τοις εκατό όγκο του φρέσκου μέσου. Αυτή η μέθοδος είναι κατάλληλη για σύγκριση "υποκριτικών" δύσκολα καλλιεργήσιμων κυττάρων (όπως thp-1) ή της κατάστασης όπου η πυκνότητα είναι χαμηλή αλλά χρειάζεται να αφαιρεθούν περισσότερα υπολείμματα στην κατάσταση προσαρμογής.
③Μέθοδος ανταλλαγής υγρού καθίζησης
Δηλαδή, αντί να χρησιμοποιηθεί φυγόκεντρος, χρησιμοποιείται η μέθοδος της φυσικής καθίζησης με βαρύτητα για να διαχωριστεί το μέσο από τα κύτταρα, έτσι ώστε να αντικατασταθεί ολόκληρο ή μέρος του φρέσκου μέσου. Ωστόσο, έχει περιορισμούς εφαρμογής—είναι κατάλληλο μόνο για κύτταρα που μπορούν να σχηματίσουν συστάδες κυττάρων συγκεκριμένου μεγέθους (διαφορετικά δεν μπορούν να καθιζάνουν φυσικά και μπορούν να φυγοκεντρηθούν μόνο σε χαμηλή ταχύτητα), ειδικά όταν πρόκειται για κύτταρα που βασίζονται στη συσσώρευση κυττάρων για να πολλαπλασιαστούν , όπως NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. Αυτή η μέθοδος μπορεί να ελαχιστοποιήσει τη μηχανική βλάβη που προκαλείται από τη διαδικασία φυγοκέντρησης κατά τη διαδικασία ανταλλαγής υγρών, ενώ διατηρεί τη συσσωματωμένη κυτταρική μάζα και η απομάκρυνση των κυτταρικών υπολειμμάτων είναι σχετικά διεξοδική.
Αφού κατακτήσετε τα παραπάνω σημεία, καθώς και έναν καλό σπόρο κυττάρων, είναι προ των πυλών να αναπτυχθούν "όμορφα" αιωρούμενα κύτταρα!
πλάκα κυτταροκαλλιέργειας
Η πλάκα κυτταροκαλλιέργειας σχήματος U της Yongyue Medical χρησιμοποιείται κυρίως για την καλλιέργεια κυττάρων εναιωρήματος, με χρήση πολυστυρενίου ιατρικής ποιότητας (PS), που παράγεται σε εργαστήριο καθαρισμού 100,000- επιπέδων, αποστειρωμένο με ακτινοβολία, χωρίς DNase, RNase και πυρετογόνο -δωρεάν , Ασφάλεια και προστασία του περιβάλλοντος.
Οι πλάκες κυτταροκαλλιέργειας διατίθενται σε διάφορες προδιαγραφές για να καλύψουν τις ανάγκες διαφόρων βακτηριακών καλλιεργειών. Οι τύποι προϊόντων χωρίζονται σε 6-καλά, 12-καλά, 24-καλά, 48-καλά, 96-καλά και 384-καλά, από το οποίο 96-πηγάδι χωρίζεται σε επίπεδο κάτω, U-bottom, V-bottom bottom. Οι πλάκες καλλιέργειας σχήματος U χρησιμοποιούνται κυρίως για την καλλιέργεια κυττάρων εναιωρήματος. Οι πλάκες καλλιέργειας σχήματος V χρησιμοποιούνται κυρίως για πειράματα ανοσολογικής αιμοσυγκόλλησης.
