Ανίχνευση PCR
Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) χρησιμοποιεί ένα κομμάτι DNA ως εκμαγείο και με τη συμμετοχή της DNA πολυμεράσης και του υποστρώματος νουκλεοτιδίου, το DNA ενισχύεται σε επαρκή ποσότητα για δομική και λειτουργική ανάλυση. Η μέθοδος ανίχνευσης PCR έχει εξαιρετικά σημαντική σημασία στην κλινική ταχεία διάγνωση βακτηριακών μολυσματικών ασθενειών.
Η αρχή της PCR χρησιμοποιείται για την ενίσχυση ενός θραύσματος DNA που βρίσκεται μεταξύ δύο γνωστών αλληλουχιών, παρόμοια με τη διαδικασία αντιγραφής του φυσικού DNA. Το μόριο DNA που πρόκειται να ενισχυθεί χρησιμοποιείται ως εκμαγείο και ένα ζεύγος ολιγονουκλεοτιδικών θραυσμάτων συμπληρωματικών προς το άκρο 5' και 3' άκρο του εκμαγείου χρησιμοποιούνται ως εκκινητές. Υπό τη δράση της DNA πολυμεράσης, ακολουθεί το πρότυπο σύμφωνα με τον ημι-δεσμευμένο μηχανισμό αντιγραφής. Επέκταση αλυσίδας μέχρι την ολοκλήρωση της νέας σύνθεσης DNA, επαναλάβετε αυτή τη διαδικασία, το θραύσμα DNA στόχος μπορεί να ενισχυθεί.
(PCR) είναι μια μέθοδος για την ενζυματική σύνθεση συγκεκριμένων θραυσμάτων DNA in vitro. Αποτελείται από πολλά βήματα μετουσίωσης σε υψηλή θερμοκρασία, ανόπτησης σε χαμηλή θερμοκρασία και κατάλληλης επέκτασης θερμοκρασίας. Χαρακτηριστικά όπως υψηλή ευαισθησία, εύκολη λειτουργία και εξοικονόμηση χρόνου. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί όχι μόνο στη βασική έρευνα όπως η απομόνωση γονιδίων, η κλωνοποίηση και η ανάλυση αλληλουχίας νουκλεϊκών οξέων, αλλά και στη διάγνωση ασθενειών ή σε οποιοδήποτε μέρος όπου υπάρχει DNA και RNA. Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (Polymerase Chain Reaction, PCR για συντομία) είναι επίσης γνωστή ως τεχνολογία ενζυματικής ενίσχυσης κατευθυνόμενη από εκκινητές in vitro μοριακή κλωνοποίηση χωρίς κύτταρα ή ειδική αλληλουχία DNA.
Η ημι-δεσμευμένη αντιγραφή του DNA είναι ένας σημαντικός τρόπος για τη βιολογική εξέλιξη και διέλευση. Το δίκλωνο DNA μπορεί να μετουσιωθεί και να λιώσει σε έναν μόνο κλώνο υπό τη δράση μιας ποικιλίας ενζύμων. Με τη συμμετοχή της DNA πολυμεράσης και ενός προαγωγέα, το δίκλωνο DNA μπορεί να αντιγραφεί στα ίδια δύο μόρια σύμφωνα με την αρχή του συμπληρωματικού ζεύγους βάσεων. Σε πειράματα, διαπιστώθηκε ότι το DNA μπορεί επίσης να μετουσιωθεί και να λιώσει σε υψηλές θερμοκρασίες και μπορεί να μετατραπεί ξανά σε διπλούς κλώνους όταν η θερμοκρασία μειωθεί. Επομένως, ελέγχοντας τη μετουσίωση και την μετουσίωση του DNA μέσω αλλαγών θερμοκρασίας και σχεδιάζοντας εκκινητές ως προαγωγείς, η προσθήκη DNA πολυμεράσης και dNTPs μπορεί να ολοκληρώσει την in vitro αντιγραφή συγκεκριμένων γονιδίων.
Το απλό θέμα είναι να χρησιμοποιήσετε ειδικό εξοπλισμό, να χρησιμοποιήσετε dNTPS, Mg2+, ειδικούς εκκινητές, DNA πολυμεράση και σύστημα ρυθμιστικού διαλύματος, να προσθέσετε πρότυπο, το οποίο είναι το δείγμα DNA για ενίσχυση in vitro, και να πραγματοποιήσετε ηλεκτροφόρηση. Εάν μπορεί να ενισχυθεί και το μέγεθος του ενισχυμένου προϊόντος είναι σύμφωνο με τη ζώνη στόχο, σημαίνει ότι ο εκκινητής και το πρότυπο είναι συγκεκριμένα και ο δείκτης ανίχνευσης είναι θετικός.
Μέθοδοι και στάδια ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων PCR
Η δοκιμή νουκλεϊκού οξέος απαιτεί πέντε βήματα: δειγματοληψία, διατήρηση δείγματος, κατακράτηση, εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος και δοκιμή υπολογιστή.
Ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος
Το πρώτο βήμα είναι η συλλογή ανθρώπινων εκκρίσεων και το σκούπισμα της ρινικής κοιλότητας ή του οπίσθιου τοιχώματος του φάρυγγα και των αμφοτερόπλευρων φαρυγγικών αμυγδαλών με ρινικό τεστ ή εξέταση φάρυγγα.
Στο δεύτερο βήμα, το ιατρικό προσωπικό κράτησε το δείγμα, βύθισε την κεφαλή του δοκιμαστικού τεμαχίου στο διάλυμα συντήρησης κυττάρων και βίδωσε το καπάκι του σωλήνα αμέσως μετά το σπάσιμο της ουράς.
Στο τρίτο μέρος, βάλτε το δείγμα σε αεροστεγή σακούλα, κρατήστε το και στείλτε το για έλεγχο έγκαιρα.
Το τέταρτο βήμα είναι η αποστολή του δείγματος στο εργαστήριο για την εξαγωγή νουκλεϊκού οξέος.
Στο πέμπτο στάδιο, το εκχύλισμα υποβάλλεται σε μια αντίδραση ενίσχυσης φθορίζουσας PCR.
Χρειάζονται επίσης κάποια αναλώσιμα και όργανα
Προστέθηκαν όργανο PCR, σωλήνας PCR, άκρη πιπέτας, πλάκα βαθιάς κοιλότητας, δεξαμενή και αντιδραστήρια
