Όπως λέει και η παροιμία, αν ένας εργαζόμενος θέλει να κάνει καλή δουλειά, πρέπει πρώτα να ακονίσει τα εργαλεία του. Η επιλογή των αναλώσιμων είναι πολύ σημαντική για να ληφθούν ικανοποιητικά αποτελέσματα πειράματος PCR. Όταν αναλύουμε τα αποτελέσματα της PCR, εστιάζουμε συχνά στην ανάλυση των εκκινητών, της συγκέντρωσης ενζύμων, της θερμοκρασίας και του χρόνου, αλλά αγνοούμε ότι τα αναλώσιμα PCR είναι επίσης ένας από τους παράγοντες που επηρεάζουν. Υπάρχουν πολλοί τύποι αναλώσιμων PCR, πώς να επιλέξετε τα σωστά αναλώσιμα PCR; Ακολουθούν μερικές ερωτήσεις που θα σας βοηθήσουν να βρείτε την απάντησή σας.
αναλώσιμα pcr
1. Γιατί τα αναλώσιμα PCR είναι γενικά κατασκευασμένα από PP;
Είτε πρόκειται για συνηθισμένη PCR είτε για ποσοτική PCR φθορισμού σε πραγματικό χρόνο (qPCR), συνήθως τα αναλώσιμά της θα έρχονται σε άμεση επαφή με αντιδραστήρια ή δείγματα, επομένως απαιτούνται υλικά υψηλής ποιότητας και καλές τεχνικές επεξεργασίας στη διαδικασία παραγωγής και προετοιμασίας. Τα γενικά αναλώσιμα είναι κατασκευασμένα από πολυπροπυλένιο (PP). Το πολυπροπυλένιο (PP) είναι ένα βιολογικά αδρανές υλικό, η επιφάνεια δεν είναι εύκολο να προσκολληθεί στα βιομόρια και έχει καλή χημική αντοχή και αντοχή στη θερμοκρασία.
2. Πώς να επιλέξετε σωλήνες/πλάκες PCR με διαφορετικούς όγκους;
Κοινοί όγκοι για σωλήνες/πλάκες PCR:
• Μονός σωλήνας/{{0}}σωλήνας/12-σωλήνας: 0,5mL, 0,2mL, 0,1mL
• {{0}}πλάκα πηγαδιού: 0,2 mL, 0,1 mL
• {{0}}πλάκα πηγαδιού: 0,02 mL
Προδιαγραφές για σωλήνες/πλάκες PCR:
Επιλέξτε το κατάλληλο προϊόν σύμφωνα με τις συγκεκριμένες πειραματικές απαιτήσεις. Ο όγκος των περισσότερων σωλήνων PCR μπορεί να ικανοποιήσει τις απαιτήσεις των αντιδράσεων PCR. Οι προδιαγραφές χωρητικότητας διατίθενται σε τυπική χωρητικότητα και χαμηλή χωρητικότητα. Γενικά, συνιστάται να επιλέξετε πρώτα σωλήνες χαμηλής χωρητικότητας. Επειδή οι σωλήνες/πλάκες του αντιδραστήρα χαμηλού όγκου έχουν μικρότερο χώρο κεφαλής, η μεταφορά θερμότητας βελτιώνεται και η εξάτμιση μειώνεται. Ταυτόχρονα, είναι απαραίτητο να αποφεύγεται η προσθήκη πολύ ή πολύ μικρού δείγματος κατά την προσθήκη δειγμάτων. Η υπερβολική ποσότητα μπορεί να οδηγήσει σε μειωμένη θερμική αγωγιμότητα, διαρροή και διασταυρούμενη μόλυνση, ενώ πολύ λίγο μπορεί να προκαλέσει απώλεια εξάτμισης δείγματος.
3. Ποια είναι η διαφορά μεταξύ του επίπεδου καλύμματος/κυρτού καλύμματος ενός σωλήνα ή του σωλήνα 8-σειράς;
Όταν ο όγκος του δείγματος είναι μικρός, προτιμώνται σωλήνες μονής ή {{0}}σωληναρίου. Ωστόσο, όταν η απαίτηση όγκου αντίδρασης είναι μεγάλη, επικρατούν απλοί σωλήνες και ο όγκος μπορεί να φτάσει τα 0,5 mL. Υπάρχουν δύο τύποι μονού σωλήνα και 8-σωλήνων με επίπεδο κάλυμμα και κυρτό κάλυμμα, ο καθένας έχει τα δικά του πλεονεκτήματα. Το επίπεδο πώμα παρέχει ακριβή παροχή σήματος φθορισμού για qPCR. εύκολο να γραφτεί σε μαρκαδόρους. Το κυρτό κάλυμμα έρχεται σε επαφή με το κάλυμμα του οργάνου PCR για τη μείωση της παραμόρφωσης του σωλήνα που προκαλείται από την πίεση. Ωστόσο, θα επηρεάσει τη μετάδοση των σημάτων φθορισμού και δεν μπορεί να εφαρμοστεί σε πειράματα qPCR.
4. Ποιες είναι οι διαφορές στα σενάρια χρήσης διαφορετικών 96- πλακών φρεατίων;
96-Οι πλάκες φρεατίων χωρίζονται γενικά σε πλάκες χωρίς ποδιές, πλάκες με ημιπερίβλημα και πλάκες με ολόσωμα.
Πλάκες χωρίς περιθώρια: Συμβατό με τους περισσότερους θερμικούς κυκλοποιητές ή μηχανές qPCR, αλλά δεν είναι κατάλληλο για αυτοματοποιημένες εφαρμογές. Η σταθερότητα δεν είναι υψηλή κατά τη διάρκεια της διαδικασίας εκτόξευσης με πιπέτα και πρέπει να χρησιμοποιείται με θήκη πλακών.
Πλάκα ημι-φούστας: Μπορεί να προσαρμοστεί για την επισήμανση ή την εφαρμογή γραμμωτού κώδικα και αυτόματη εφαρμογή και έχει καλή σταθερότητα με πιπέτα.
Πλήρης πλάκα φούστας: πολύ κατάλληλο για αυτοματοποιημένες εργαστηριακές εφαρμογές, αλλά και κατάλληλο για ετικέτες και εφαρμογές barcode. Καλή μηχανική αντοχή, κατάλληλη για μηχανές PCR με προεξέχοντα δομοστοιχεία και υψηλή σταθερότητα κατά την πιπέτα.
5. Είναι το υλικό πλάκας/σωλήνα PCR παχύτερο και πιο σταθερό;
όχι. Τα αναλώσιμα PCR πρέπει να έχουν ομοιόμορφο πάχος τοιχώματος για να παρέχουν σταθερή μεταφορά θερμότητας. Το εξαιρετικά λεπτό τοίχωμα σωλήνα είναι 50 τοις εκατό λεπτότερο από την τυπική έκδοση, γεγονός που μπορεί να μειώσει περαιτέρω το θερμικό φράγμα, με αποτέλεσμα ταχύτερη και καλύτερη απόκριση.
6. Για τις πλάκες 96-πηγαδιού ή 384-πηγαδιού, γιατί οι κομμένες γωνίες και οι ετικέτες δεν είναι ίδιες;
Κοπή γωνίας: Η επιλογή της γωνιακής θέσης κοπής της πλάκας PCR εξαρτάται από τις απαιτήσεις του προσαρμοσμένου οργάνου για εύκολη τοποθέτηση.
Αναγνώριση: Τα αλφαριθμητικά σημάδια στις πλάκες PCR βοηθούν στον εντοπισμό μεμονωμένων φρεατίων και θέσεων δειγμάτων. Γενικά, είναι ένα λογότυπο με υπερυψωμένο αριθμό χρώματος ή ένα χαραγμένο λογότυπο. Για ορισμένα αυτοματοποιημένα πειράματα εφαρμογής, η πλάκα αντίδρασης με εντυπωμένα σημάδια θα είναι καλύτερα σφραγισμένη.
7. Ορισμένα φρεάτια πλακών PCR προεξέχουν, ενώ άλλα είναι επίπεδα. Ποιό είναι καλύτερο?
Αυτό που είναι κατάλληλο είναι καλό. Οι κοινές πλάκες PCR έχουν δύο τύπους: επίπεδες άκρες φρεατίων και ανυψωμένες άκρες φρεατίων. Πλάκα αντίδρασης με επίπεδη άκρη φρεατίου, κατάλληλη για τους περισσότερους θερμοκυκλωτές. Η πλάκα αντίδρασης στην άκρη της οπής ανύψωσης είναι βολική για σφράγιση, η οποία μπορεί να μειώσει τον κίνδυνο διασταυρούμενης μόλυνσης μεταξύ των δειγμάτων.
8. Πώς να επιλέξετε σωλήνες/πλάκες PCR διαφορετικών χρωμάτων;
Για συνηθισμένες αντιδράσεις PCR, μπορούν να χρησιμοποιηθούν διαφανείς. Στην αντίδραση PCR σε πραγματικό χρόνο, η ευαισθησία και η συνοχή του λευκού σωλήνα είναι σχετικά υψηλότερες. Τα λευκά τοιχώματα του σωλήνα εμποδίζουν τη διέλευση του φθορισμού μέσα από τα τοιχώματα του σωλήνα και τη διάθλαση, εμποδίζοντας έτσι τον φθορισμό να περάσει στη μονάδα θέρμανσης, να απορροφηθεί από τη μονάδα ή να ανακλά ασυνεπής. Σε σύγκριση με τους διαφανείς σωλήνες, μπορούν να συλλεχθούν ισχυρότερα και πιο εστιασμένα σήματα φθορισμού στην κορυφή των λευκών σωλήνων.
